研究背景

亞硝胺類雜質(zhì)屬于ICH M7（R1）《評(píng)估和控制藥物中DNA反應(yīng)性（致突變）雜質(zhì)以限制潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)》指南中提及的"關(guān)注隊(duì)列"物質(zhì)；其中根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的致癌物清單，NDMA和NDEA均屬于2A類致癌物質(zhì)，因此亞硝胺類（NDMA和NDEA）雜質(zhì)應(yīng)在藥品中予以嚴(yán)格控制，基因毒性雜質(zhì)由于控制限度低，基質(zhì)復(fù)雜，需要開發(fā)和使用高靈敏度高選擇性的定量檢測(cè)方法。本方案在文獻(xiàn)基礎(chǔ)上^[1][2][3]，開發(fā)建立了基于APCI源的LC-MS/MS方法，用于痕量的NDMA和NDEA分析檢測(cè)，該方法具有準(zhǔn)確、靈敏、快速的特點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器、試劑與材料

·Thermo Scientific? Vanquish?超高效液相色譜

·Thermo Scientific? TSQ Altis?三重四極桿質(zhì)譜，配APCI源

·Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 150 mm, 2.7 μm

·蒸餾水（屈臣氏）、甲醇、甲酸（色譜純）

實(shí)驗(yàn)方法

色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18（3.0 x 150 mm, 2.7 μm）

流速：0.40mL/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣量10μL

質(zhì)譜條件：

離子源參數(shù)

SRM掃描模式

結(jié)果與討論

儀器靈敏度、線性范圍和精密度

將高濃度標(biāo)準(zhǔn)品逐級(jí)稀釋，配制成系列標(biāo)準(zhǔn)曲線(0.2、1、5、10、50、100、200ng/mL)考察儀器靈敏度、重現(xiàn)性和線性范圍。

靈敏度：結(jié)果表明NDMA和NDEA的LOD（S/N≥3）均為0.1ng/mL。

線性范圍：NDMA和NDEA在0.2~200ng/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

重現(xiàn)性：結(jié)果表明，連續(xù)進(jìn)樣6針，NDMA和NDEA的RSD值＜5%，具有非常好的重現(xiàn)性。

樣品分析

檢測(cè)5例客戶樣本，按照本文所建立方法進(jìn)行分析。由下圖可以看出，NDMA和NDEA得到了比較好的分析結(jié)果，各離子通道在掃描時(shí)間內(nèi)不存在干擾峰，可準(zhǔn)確定量定性。

結(jié)論

本方案建立了基于APCI源的LC-MS/MS分析方法，用于測(cè)定NDMA和NDEA。該方法分析速度快，靈敏度高，能夠滿足NDMA和NDEA的分析要求，適合大批量定性和定量分析。

參考文獻(xiàn)：

[1]徐艷梅, 韓彬, 閆凱, 等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)irbesartan原料藥及其片劑中3種N-亞硝胺類基因毒性雜質(zhì)[J]. 藥物分析雜志, 2021, 41(4): 720 - 726.

[2]Fritz S?rgj, Martina Kinzig, Mona Abdel - Tawab, et al. The contamination of valsartan and other sartans, part 1: New findings[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2019, 172: 395 - 405.

[3]Yamamoto, E., Kan-no, H., Tomita, N., Ando, D., Miyazaki, T., & Izutsu, K. (2022). Isolation of N-nitrosodimethylamine from drug substances using solid-phase extraction-liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 210, 114561.